Debiutas Londono Vest Endo teatre bus pirmas kartas per pastaruosius 13 metų, kai Madona pasirodys teatro scenoje. Paskutinį kartą ji vaidino 1988 metais su Brodvėjaus veteranais Ronu Silveriu ir Džo Mantegna amerikiečių dramaturgo Deivido Mameto pjesėje.
1986 metais kartu su tuometiniu vyru Šonu Penu Madona vaidino spektaklyje "Goose and Tomtom", o prieš išgarsėdama sukūrė vaidmenį 1980 metų sceniniame pastatyme "Dirbtinis apšvietimas" ("In Artificial Light").
Madonos aktorinė karjera sukosi Holivude, kur jos pasisekimas buvo permainingas - dainininkė sėkmingai vaidino "Evitoje" ("Evita") ir "Kas ta mergina" ("Who That Girl") ir patyrė fiasko tokiuose filmuose kaip "A lyga" ("A League") ir "Kūnas, kaip daiktinis įrodymas" ("Body of Evidence").